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野百合碱处理大鼠肺动脉高压模型的塑造

 1 材料与方法

  1.1 实验动物与MCT溶液配制

  雄性Wister SD大鼠140只,体重150180g,由中国医学科学院北京协和医院实验动物中心提供;MCT结晶(美国产) 溶解在0.5N盐酸(HCL)溶液,用0.5N碳酸氢钠(NaHCO3)调整pH7.4的溶液。

  1.2 MCT肺动脉高压动物模型建立

  MCT注射大鼠(单剂腹腔注射60mg/kg-120只为MCT-PAH动物模型组(MCT组),以相同剂量等张生理盐水以相同方法注射正常大鼠10只为对照组(IS组);两组大鼠正常饲养,每隔7d取各组大鼠1只处死,行大体病理观察,且取血标本及肺组织保存;对照组在第28天(IS28),试验组在第28天(MCT28)、第42天(MCT42)各取大鼠5只行右心导管检查及肺动脉病理观察。

  1.3 对照组用大鼠血浆(DB)和试验组用大鼠血清(SB)制备。

  DB制备:取成年雄性Wistar SD级大鼠20只,体重150180g。在每只大鼠的尾静脉处切一约1mm的切口,同时滴入肝素钠和生盐水(12)溶液0.20.5ml, 取血0.51.0ml, 分别取20只大鼠尾静脉血20 mlSB制备:取成年雄性Wistar SD级大鼠20只,体重150180g。一次性腹腔注射MCT 60mg/kg-1。饲养至14d,分别取20只大鼠尾静脉血20ml。取得肝素抗凝大鼠血后,立刻以15002000r/min离心1520min后取上清液,储藏-70℃冰柜保存。

  1.4 实验与分组

  将实验大鼠分为对照组(D组)35只,试验组(S组)35只。S组从大鼠阴茎静脉注入SB的血浆液,D组用同样剂量同样方法注入DB的血浆液。两组大鼠分别做好标志,饲养到第7天后每隔24d每组处死大鼠1,做大体病理观察,17225360天,每组取5只大鼠进行肺动脉血流动力学测定后,处死实验大鼠,取双侧肺组织,10%甲醛液固定保存。
  
  1.5 观察指标

  右心导管检查:将乌拉坦(北京产)配制成12%浓度,称取大鼠体重,以1.0ml/kg腹腔内注射,**后分离右侧颈内静脉,置入微导管(北京协和医院提供),连接Gould(美国产)心电监护仪,缓慢推送导管至右心房、右心室、肺动脉,出现典型稳定的压力曲线波时,记录右心室压(RVP)、肺动脉收缩压(PAP)及压力曲线。纸速为5mm/s,计算平均肺动脉压(mPAP)。肺动脉病理标本制作:切开大鼠左侧胸腔,取左侧肺组织,切除其上附着的纵隔组织后置入10%甲醛液固定,肺门横断取材、石蜡包埋,制片,HE染色。

  1.6 统计学处理

  各项数据以(x±s)表示,采用SPSS 12.0统计软件进行单因素方差分析及q检验。

  2 结果

MCT处理大鼠肺动脉压力(表1)及病理改变。对照组大鼠在整个试验期全部生存(10只),而MCT处理大鼠试验过程死亡4只。大体病理:对照组大鼠肺组织呈淡红色,未见出血点、瘀点、瘀斑;单剂注射MCT大鼠在MCT71421283542天肺组织表现变苍白,均见不同程度的瘀点瘀斑,随时间延长更趋明显。试验组SB79肺表面基本正常,SB12141719212327两侧肺表面变白均可见点状出血灶、瘀斑,右肺中、后叶明显。光镜检查:观察对照组肺动脉血管,内皮细胞扁平连续,细胞分布均匀,大小厚薄较一致。试验组肺动脉内膜增生,中层增厚(图12),并随时间的延长日趋严重(图34),SB60动脉中膜厚度比例已达正常对照组的两倍之多(图5)。电镜检查:对照组正常肺动脉内皮细胞扁平紧紧地粘附在基底膜上,细胞的游离面出现微绂毛突起。试验组SB17肺动脉壁增厚,平滑肌增生,平滑肌细胞核固缩(图6);SB22平滑肌细胞增宽,胶原纤维增生(图7);SB53内皮细胞基底部变窄,向血管腔内突出,部分核固缩,空泡拱桥样改变(图8);SB60弹力板粗不匀,内皮细胞空泡形成,血管壁增厚(图9)。两组肺动脉血流动力学检测结果见表2。表1 MCT处理大鼠肺血流动力学与右心肥大指数的变化()2 试验组与对照组肺动脉平均压与右室压的比较(略)

 

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